ELISA (test immunoenzymatyczny): Różnice pomiędzy wersjami

[wersja nieprzejrzana][wersja nieprzejrzana]
Usunięta treść Dodana treść
m drobne redakcyjne
Ananael (dyskusja | edycje)
→‎Test ELISA bezpośredni i pośredni: poprawka terminologiczna, za sugestią ze WP:ZB.
Linia 32:
W przedstawionym powyżej teście podwójnego wiązania, antygen po związaniu przez przeciwciała umieszczone na płytce był wykrywany przez kolejne przeciwciało, które związano ze znacznikiem (enzymem). Taką metodę wykrywania antygenu, tzn. wykrywanie go za pomocą jednego tylko przeciwciała, nazywamy '''bezpośrednim testem ELISA'''. Zaletą tej metody jest jej szybkość w porównaniu do przedstawionej dalej metody pośredniej. Warto jednak zauważyć, że test bezpośredni wymaga obecności ''swoistego'' przeciwciała, które dodatkowo musi być wyznakowane enzymem. Zatem do wykrycia innego antygenu trzeba przygotować kolejną porcję znakowanych swoistych przeciwciał, co jest kosztowne i nie zawsze możliwe do wykonania. Tych wad nie posiada test pośredni, jest on jednak bardziej pracochłonny.
 
W przypadku '''pośredniego testu ELISA''' przeciwciało monoklonalne rozpoznające swoiście antygen (przeciwciało pierwszorzędowe, ang. ''primary antibody'') nie jest znakowane. (nazwijmyZnakowane jejest pierwszymnatomiast przeciwciałemprzeciwciało -drugorzędowe (ang. ''primarysecondary antibody''). Znakowaneprzyłączające jestsię natomiastdo kolejneprzeciwciała przeciwciałopierwszorzędowego, rozpoznające dany izotyp (patrz: [[przeciwciało]]) immunoglobulin. Mówiąc inaczej, dysponujemy dodatkowym przeciwciałem (drugim przeciwciałem - ang. ''secondary antibody''), rozpoznającym klasę przeciwciała pierwotnego.

Jeżeli zatem do wykrycia antygenu używamy swoistego przeciwciała klasy IgG, to drugie przeciwciało musi rozpoznawać właśnie przeciwciała klasy IgG, niezależnie od tego, jaką wykazują one specyficzność. Zaletą tej metody jest to, że nie trzeba znakować specyficznych względem antygenu przeciwciał. Pozwala to na użycie różnych przeciwciał pierwotnychpierwszorzędowych, bez potrzeby dodatkowych manipulacji związanych z ich znakowaniem, po czym przeciwciała te mogą zostać wykryte za pomocą zawsze takich samych przeciwciał znakowanych. Poniższy rysunek pokazuje różnice między bezpośrednim (1) i pośrednim (2) testem ELISA (jest to już wynik końcowy, bez ukazywania kolejnych kroków):
 
<center>[[grafika:Elisa_pośrednia_i_bezpośrednia.svg|400px]]</center>