ELISA (test immunoenzymatyczny): Różnice pomiędzy wersjami
| [wersja przejrzana] | [wersja przejrzana] |
Usunięta treść Dodana treść
m WikiCleaner 0.99 - Link tożsamy z tekstem linka (WP:CHECK) |
+linki; +grafika; -dubel z Zobacz też |
||
Linia 6:
== Opłaszczanie i blokowanie fazy stałej ==
[[plik:Microtiter plate.JPG|thumb|96-dołkowa płytka ([[język angielski|ang.]] ''Microtiter plate'') służąca zwykle do przeprowadzenia testu.]]
Niezależnie od rodzaju przeprowadzanego badania, każdy test immunoenzymatyczny wymaga opłaszczenia fazy stałej przeciwciałem lub [[antygen]]em. Jako fazy stałej używa się zwykle płytek [[polistyren]]owych lub [[Szkło akrylowe|pleksiglasowych]] ze studzienkami (dołkami), do których można dodawać niewielkie ilości roztworów. Każda studzienka pełni więc funkcję mikroprobówki, przy czym w testach ELISA używa się zwykle płytek 96-dołkowych. Oprócz płytek plastikowych możliwe jest także używanie innych materiałów, np. różnego rodzaju błon o ustalonym składzie chemicznym czy też granulek materiału [[magnetyzm|magnetycznego]].
Opłaszczanie z reguły przeprowadza się przez dodanie do studzienki przeciwciała lub antygenu przeznaczonego do umieszczenia na fazie stałej. Całość jest następnie inkubowana przez określony czas, najpierw zwykle w temperaturze 37 °C, a potem 4 °C, choć możliwe są także inne metody, co zależy od przeprowadzanego badania. Temperatura jest jednym z najważniejszych czynników, nie może jednak przekroczyć 56 °C, gdyż w przypadku białek dojdzie do [[Denaturacja białka|denaturacji]]. Istotne znaczenie może mieć także [[Roztwór buforowy|bufor]], w którym zawieszony jest czynnik stosowany do opłaszczenia fazy stałej.
Po przeprowadzeniu opłaszczenia należy jeszcze zablokować miejsca niezajęte przez przeciwciało lub antygen. Dokonuje się tego za pomocą czynników blokujących, np. roztworu [[owoalbumina|owoalbuminy]] lub odtłuszczonego [[mleko|mleka]], co zapobiega nieselektywnemu przyłączaniu się białek do fazy stałej podczas następnych etapów testu, wymagających także inkubacji w określonych temperaturach.
Linia 44 ⟶ 45:
=== Zobacz też ===
* [[test immunofluoerescencyjny]],
* [[immunocytochemia]],
| |||